原代細(xì)胞培養(yǎng)基配制方法

賽奧斯的細(xì)胞培養(yǎng)體系一般由以下四種（三種）組成：

第一次使用時(shí)先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS轉(zhuǎn)移到4℃溶解后，在滅菌后的百級(jí)潔凈等級(jí)環(huán)境中操作，所使用的容器和移液耗材均需要進(jìn)行過無菌處理。添加劑和雙抗通常濃度為100X（100倍工作濃度）。血清的添加比例有0%（不添加），1%（5mL），2%（10mL），5%（25mL），10%（50mL）幾種。

首先將解凍的FBS、添加劑和雙抗進(jìn)行分裝，平均分裝成5-10份，留下本次配制所需要的量，剩余的繼續(xù)放回-20℃保存，之后按需取用融化后配制完全培養(yǎng)基，避免反復(fù)凍融。

建議用無菌的50mL離心管盛裝配置好的完全培養(yǎng)基。

配制方法：

在每個(gè)50mL離心管中加入①500uL添加劑、②500uL雙抗、③50×血清百分比mL的胎牛血清、④（50×（1-血清百分比）-1）mL的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子，顛倒混勻備用。

例如：在血清比例為5%的條件下，50mL離心管中各組分的體積分別為：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：（50×（1-5%）-1）=46.5mL+添加劑：500uL+雙抗：500uL+血清：50×5%=2.5mL

配置好的培養(yǎng)基置于4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白，易發(fā)生降解，故配置好的完全培養(yǎng)基有效期僅為3-4周，請(qǐng)盡快使用。因此建議每次配制1-2管（50-100mL），當(dāng)然使用量大的情況下也可以適量增加配置量。

P.S.：不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)中混勻使用，原因如下：

1、500mL的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積較大，灌裝時(shí)體積波動(dòng)很大，直接加入，無法準(zhǔn)確地控制因子和血清的工作濃度。

2、配制好的培養(yǎng)基僅能在4℃保存3-4周，如果期間沒用完，繼續(xù)使用會(huì)影響培養(yǎng)效果。如果是-20℃保存，可以延長保存時(shí)間，但是反復(fù)凍融也會(huì)影響完全培養(yǎng)基的效果。

3、如果使用培養(yǎng)基時(shí)由于操作失誤導(dǎo)致污染，分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。