SH-SY5Y人神經母細胞瘤細胞

產品編號：CL-214h

一、細胞介紹

SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉移灶的神經母細胞瘤SK-N-SH細胞系經三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。 該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大于1X10⁶細胞/cm²。

二、細胞特性

來源：腦神經母細胞瘤，轉移部位骨髓

形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

注意：該細胞為疏松貼壁生長，在運輸過程中發(fā)生細胞脫落，這是正常現(xiàn)象，傳代換液時請輕柔操作。

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：DMEM＋10%優(yōu)質胎牛血清＋1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

四、收貨注意事項

1) 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據。

3) 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4) 對于貼壁能力弱的細胞：如收到貨后，發(fā)現(xiàn)大片細胞聚團脫落，將培養(yǎng)瓶內所有培養(yǎng)基離心收集，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清；沉淀加入 1mL 胰酶輕輕吹打消化約 1 分鐘，加入 5mL 完全培養(yǎng)基終止消化，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清；用 1-2mL 完全培養(yǎng)基吹勻，接種至 2 個含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，第二天給細胞換液。

細胞培養(yǎng)操作步驟

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：細胞密度達80%-90%，即可進行傳代

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化0.5-1min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加 5mL 以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清液，補加 1-2mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。

4. 按5-6mL/瓶補加完全培養(yǎng)基，將細胞懸液按 1:2 ~ 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。