CGM1人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞

產(chǎn)品編號：CL-692h

細胞特性

形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮生長

含量：>1x10⁶cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：僅供科研使用

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

收貨須知

收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好！

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對細胞進行常規(guī)操作。在無菌條件下，將原瓶培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心管中，1000-1200rpm/min離心5～10min后重懸細胞，轉(zhuǎn)移懸浮細胞到新的T25瓶中，補加完全培養(yǎng)基到10mL，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）細胞復蘇

①　凍存管從液氮或-80℃中取出放入 PE 手套中，迅速沒入 37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以 1 min內(nèi)全部溶解為宜；

②　在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm/min 離心 5 分鐘，棄去上清液，用 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸細胞；

③　然后將細胞懸液加入到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中豎立培養(yǎng)。

（二）細胞傳代

①　離心法：收集細胞，1000rpm條件下離心5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2 的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的T25瓶中。

②　半量換液法：培養(yǎng)瓶靜置5-10分鐘后，將上清培養(yǎng)基輕輕吸走一半，剩余留有細胞沉淀的培養(yǎng)基重懸混勻，細胞懸液按1：2的比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的T25瓶中。

③　注意培養(yǎng)基pH值變化和細胞密度，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到大于2×10⁶個/mL時，重復傳代操作或者凍存。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

①　細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計 數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL；

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1mL凍存 液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好 名稱、代數(shù)、日期等信息；

③　將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。 同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

    注意事項：

    ① 細胞具有密度依賴性，首次傳代（密度達到 80%），建議 1:2 傳代（保持細胞密度），且優(yōu)先在 T25 瓶中。

    ② 密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。