PANC-1人胰腺癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-120h

細(xì)胞介紹

該人胰腺癌細(xì)胞PANC-1來源于一名56歲白人男性。1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生長。此細(xì)胞可以在瓊脂糖上生長。

細(xì)胞特性

來源：人胰腺/導(dǎo)管

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用

細(xì)胞運輸、保存及注意事項

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

注意：建議復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細(xì)胞傳代

①　待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

②　棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，吸凈殘余的PBS。

③　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶使細(xì)胞全部脫落，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基終止消化。

④　輕輕打勻后吸出，將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心3-5min，棄去上清液。

⑤　向細(xì)胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按1：1比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

（三）細(xì)胞凍存

①　細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細(xì)胞/ml。

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×10^6~1×10^7個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息

③　將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。