Toledo人彌漫大B淋巴瘤細胞

產(chǎn)品編號：CL-745h

一、細胞簡介

Toledo是1990年從患有彌漫性大細胞淋巴瘤(非霍奇金B(yǎng)細胞)的成年白人女性患者的外周血中分離的B淋巴細胞系。經(jīng)過大劑量化療和骨髓移植后，患者隨后出現(xiàn)腦部淋巴瘤。盡管細胞的形態(tài)類似于伯基特淋巴瘤，但細胞缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色體易位。核型確實表現(xiàn)出多種染色體畸變。細胞不表達表面或細胞質(zhì)免疫球蛋白。這些細胞對 Epstein-Barr 病毒呈陰性。

二、細胞特性

來源：成年白人女性外周血中分離的B淋巴細胞

形態(tài)：淋巴母細胞樣，懸浮生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

注意：在細胞回收過程中避免培養(yǎng)基堿度過高，非常重要。建議用推薦的完全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，并分配到T25培養(yǎng)瓶中。在添加小瓶內(nèi)容物之前，將含有完全生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱中至少15分鐘，以使培養(yǎng)基達到正常pH值（7.0~7.6）。

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 完全培養(yǎng)基：RPMI-1640＋10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清＋1%雙抗（Toledo完全培養(yǎng)基）

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?；濕度為70%-80%

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細胞凍存液（貨號：RC-0102）

四、收貨注意事項

1) 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落，請拍照后及時與我們聯(lián)系。

2) 75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于培養(yǎng)箱靜置約2-3h。在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 對于懸浮生長的細胞：靜置后，抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞，1000rpm離心5分鐘，棄去上清，重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

細胞培養(yǎng)操作說明

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，接種到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：細胞密度達80%-90%，即可進行傳代

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×10?~1×10?個/mL（不同細胞對密度要求不同）可以維持細胞的正常生長。

如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。