間充質(zhì)干細胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒

產(chǎn)品編號：MSCYD-004

產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品為SAIOS團隊精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細胞成脂誘導(dǎo)分化試劑盒，可增強間充質(zhì)干細胞向成脂細胞方向誘導(dǎo)分化的能力。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

試劑盒組成成分和保存

        注意：1.為保證產(chǎn)品的有效性，請避免反復(fù)凍融。

             2.配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基保存于2-8℃，有效期為2周，請根據(jù)實驗用量合理配制。

質(zhì)量控制

ü無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）

üpH測試

ü滲透壓檢測

ü內(nèi)毒素

產(chǎn)品使用說明

1. 成誘脂導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基的配制

①室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉淀物，屬正?，F(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）

②根據(jù)實驗用量，于無菌操作臺中配制誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，建議每次配制50mL，配制比例見表一：

           表一

2. 成脂誘導(dǎo)分化實驗步驟

①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細胞，將其消化下來，離心收集，使用含10%FBS的完全培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度，均勻鋪于培養(yǎng)瓶/板中，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（接種細胞量與接種面積按照1×105cell/cm2計算，可參考表二）

表 二

②待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導(dǎo)分化。

③小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：完全培養(yǎng)基加入細胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）

④每2day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時，若細胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色，是由于細胞量較大，培養(yǎng)基消耗較快導(dǎo)致的，請及時調(diào)整為每日換液。（注意：完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預(yù)熱。）

⑤細胞誘導(dǎo)3周后，即可進行油紅O染色鑒定。

3. 油紅染色分析

①細胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后，小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次。加入適量細胞固定液，室溫固定30 min。（細胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）

②配制油紅O工作液：油紅O貯存液與蒸餾水按照3：2配制，（例：油紅O貯存液3mL，蒸餾水2mL），混勻。使用濾紙過濾，收集濾液，即為油紅O工作液。（注意：成脂細胞內(nèi)的油滴極易脫落，操作時須謹(jǐn)慎。）

③細胞固定完成后，吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入油紅O染色液，每孔1mL，室溫染色30min。（注意：油紅O工作液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀，PBS洗去即可。）

④吸出染色液，PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果。細胞內(nèi)油滴著色，呈紅色。（注意：油紅O工作液不可重復(fù)使用，不建議回收。）