hREC人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞

產(chǎn)品編號：CL-621h

細(xì)胞特性

形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞，短梭形，邊緣不規(guī)則

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：氣相：95%AIR，5%CO₂；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基（貨號：PM-002）

收貨須知

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好！

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25形式：收貨后于培養(yǎng)箱靜置2-3h，再對細(xì)胞進行常規(guī)操作。請嚴(yán)格按照本說明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務(wù)。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）細(xì)胞復(fù)蘇

①凍存管從液氮或-80℃中取出放入PE手套中，迅速沒入37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以1 min內(nèi)全部溶解為宜；

②在超凈臺中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm離心5 min，棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

③將細(xì)胞懸液加入到含有5-6mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

復(fù)活性：可復(fù)活，培養(yǎng)18h后觀察細(xì)胞貼壁，120h密度達到80%。

（二）細(xì)胞傳代

①將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入1-2mL胰酶替代物(TrypLE? Express，貨號: 12605010)；

②鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶替代物輕輕吹打細(xì)胞層 某處，肉眼可見細(xì)胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶替代物，加入5-6mL完 全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散；

③將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，置于培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)；

④注意培養(yǎng)基pH值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達到80%-90%時， 重復(fù)傳代操作或者凍存。

注意事項：

①細(xì)胞具有密度依賴性，首次傳代（密度達到80%），建議1:2傳代（保持細(xì)胞密度），且優(yōu)先在 T25瓶中。

②密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。以T25瓶為例：

①細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì) 胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL；

②1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細(xì)胞凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細(xì)胞，按每1mL 凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息；

③將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍 存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。