A549/DDP人肺癌細胞/順鉑耐藥株

產(chǎn)品編號：CL-669h

一. 細胞簡介

該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。A549/DDP細胞為由A549細胞構建的耐DDP藥物細胞株。

二. 細胞特性

來源：人肺癌細胞耐藥篩選

形態(tài)：上皮細胞樣，多角形，貼壁生長

培養(yǎng)條件：氣相：5%CO₂+95%AIR；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/2mL凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

三．完全培養(yǎng)基配制

該細胞完全培養(yǎng)基為（本公司提供配制好的完培，貨號：CM-669h）：

注意：細胞復蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞密度達約8×10?個/mL時，方可添加0.5ug/mL DDP藥物；若細胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當降低DDP的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含DDP的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的DDP濃度。

四．細胞接收注意事項

收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在24小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮。

T25瓶形式：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管因溫差變化發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細胞傳代

細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳代，步驟如下：

① 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

② 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

③ 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，補加1~2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2比例分到2個新的培養(yǎng)瓶中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至0.5ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約8×10?個/mL，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的DDP藥物濃度。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

① 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細胞凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代 數(shù)、日期等信息。

③ 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。