細胞介紹

    SHP-77 保留了SCLC的重要特征，具有穩(wěn)定的生物化學特性，可以連續(xù)培養(yǎng)。該細胞系是小細胞肺癌中一種不常見的未分化大細胞突變體。它雖然具有突變體的形態(tài)，但保持了經(jīng)典SCLC的生化特性。電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)存在腺體形成和胞漿內(nèi)板層體(intracytoplasmic lamellar bodies)。這些細胞表達神經(jīng)內(nèi)分泌標記物L-多巴脫羧酶和致密核心分泌顆粒(dense core secretory granules)。

  SHP-77可用做檢測51Cr和111In釋放對體外細胞及裸鼠體內(nèi)毒性的靶標，用于評估肺癌患者的細胞和血清的免疫反應水平。該細胞可用于評估接受放射或化學療法治療的SCLC患者的免疫狀況。經(jīng)本庫STR檢測無誤。

  STR鑒定結果為：Amelogenin: X,X；CSF1PO: 10,11；D13S317: 8,8；D16S539: 11,11；D5S818: 12,12；D7S820: 11,11；TH01: 7,7；TPOX: 9,11；vWA: 16,16。

細胞特性

來源：54歲 男性 肺; 小細胞肺癌

形態(tài)：懸浮和松散貼壁

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用

細胞運輸、保存及注意事項

 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況。

注意：建議復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）

①將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中，待細胞密度達到70%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)。

②加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

③將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

（三）細胞凍存

①細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml。

②1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。