人腎小球系膜細胞（HMC）

產(chǎn)品編號：CL-519h

細胞特性

形態(tài)：貼壁生長，成纖維細胞樣

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用

細胞運輸、保存及注意事項

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞的復蘇

①　凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速沒入37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以1min內(nèi)全部溶解為宜；

②　在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi)，1000-1200rpm離心5min，棄去上清液，用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞；

③　然后將細胞懸液加入到含有6-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

（二）細胞傳代

①　將舊培養(yǎng)液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 1-2mL 胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

②　鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處，肉眼可見細胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶，加入 5-6 毫升完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散；

③　將細胞懸液按1:2 比例分到新的 T25 瓶中，添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

④　注意培養(yǎng)基 pH 值變化和細胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%-90%時，重復傳代操作或者凍存。

注意事項：細胞具有密度依賴性，首次傳代（密度達到 80%），建議 1:2傳代（保持細胞密度），且優(yōu)先在 T25 瓶中。密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。

（三）細胞凍存

①　細胞凍存時，細胞計數(shù)后加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×10⁶ ~ 1×10⁷個細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

②　將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。